← 返回主页

实验室常用培养基的配制方法

Ampicillin (100 mg/ml)

组份浓度:

  • 100 mg/ml Ampicillin

配制量: 50 ml

配制方法:

  1. 称量 5 g Ampicillin 置于 50 ml 离心管中。
  2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml。
  3. 用 0.22 µm 滤器过滤除菌。
  4. 小份分装 (1 ml/份) 后, -20℃保存。

IPTG (24 mg/ml)

组份浓度:

  • 24 mg/ml IPTG

配制量: 50 ml

配制方法:

  1. 称量 1.2 g IPTG 置于 50 ml 离心管中。
  2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml。
  3. 用 0.22 µm 滤器过滤除菌。
  4. 小份分装 (1 ml/份) 后, -20℃保存。

X-Gal (20 mg/ml)

组份浓度:

  • 20 mg/ml X-Gal

配制量: 50 ml

配制方法:

  1. 称量 1 g X-Gal 置于 50 ml 离心管中。
  2. 加入 40 ml DMF (二甲基甲酰胺), 充分混合溶解后, 定容至 50 ml。
  3. 小份分装 (1 ml/份) 后, -20℃避光保存。

LB 培养基

组份浓度:

  • 1% (W/V) Tryptone
  • 0.5% (W/V) Yeast Extract
  • 1% (W/V) NaCl

配制量: 1 L

配制方法:

  1. 称量下列试剂, 置于 1 L 烧杯中。
    • Tryptone 10 g
    • Yeast Extract 5 g
    • NaCl 10 g
  2. 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解。
  3. 滴加 5 N NaOH (约 0.2 ml), 调节 pH 值至 7.0。
  4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。
  5. 高温高压灭菌后, 4℃保存。

LB/Amp 培养基 (Amp added after autoclaving)

组份浓度:

  • 1% (W/V) Tryptone
  • 0.5% (W/V) Yeast Extract
  • 1% (W/V) NaCl
  • 0.1 mg/ml Ampicillin

配制量: 1 L

配制方法:

  1. 称取下列试剂, 置于 1 L 烧杯中。
    • Tryptone 10 g
    • Yeast Extract 5 g
    • NaCl 10 g
  2. 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解。
  3. 滴加 5 N NaOH (约 0.2 ml), 调节 pH 值至 7.0。
  4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。
  5. 高温高压灭菌后, 冷却至室温。
  6. 加入 1 ml Ampicillin (100 mg/ml) 后均匀混合。
  7. 4℃保存。

TB 培养基

组份浓度:

  • 1.2% (W/V) Tryptone
  • 2.4% (W/V) Yeast Extract
  • 0.4% (V/V) Glycerol
  • 17 mM KH₂PO₄
  • 72 mM K₂HPO₄

配制量: 1 L

配制方法:

  1. 配制磷酸盐缓冲液 (0.17 M KH₂PO₄, 0.72 M K₂HPO₄) 100 ml。

    溶解 2.31 g KH₂PO₄ 和 12.54 g K₂HPO₄ 于 90 ml 的去离子水中, 搅拌溶解后, 加去离子水定容至 100 ml, 高温高压灭菌。

  2. 称取下列试剂, 置于 1 L 烧杯中。
    • Tryptone 12 g
    • Yeast Extract 24 g
    • Glycerol 4 ml
  3. 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解。
  4. 加去离子水将培养基定容至 1 L, 高温高压灭菌。
  5. 待溶液冷却至 60℃以下时, 加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
  6. 4℃保存。

TB/Amp 培养基 (Amp added after buffer)

组份浓度:

  • 1.2% (W/V) Tryptone
  • 2.4% (W/V) Yeast Extract
  • 0.4% (V/V) Glycerol
  • 17 mM KH₂PO₄
  • 72 mM K₂HPO₄
  • 0.1 mg/ml Ampicillin

配制量: 1 L

配制方法:

  1. 配制磷酸盐缓冲液 (0.17 M KH₂PO₄, 0.72 M K₂HPO₄) 100 ml。

    溶解 2.31 g KH₂PO₄ 和 12.54 g K₂HPO₄ 于 90 ml 的去离子水中, 搅拌溶解后, 加去离子水定容至 100 ml, 高温高压灭菌。

  2. 称取下列试剂, 置于 1 L 烧杯中。
    • Tryptone 12 g
    • Yeast Extract 24 g
    • Glycerol 4 ml
  3. 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解。
  4. 加去离子水将培养基定容至 1 L 后, 高温高压灭菌。
  5. 待溶液冷却至 60℃以下时, 加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液和 1 ml 的 Ampicillin (100 mg/ml)。
  6. 均匀混合后 4℃保存。

SOB 培养基

组份浓度:

  • 2% (W/V) Tryptone
  • 0.5% (W/V) Yeast Extract
  • 0.05% (W/V) NaCl
  • 2.5 mM KCl
  • 10 mM MgCl₂

配制量: 1 L

配制方法:

  1. 配制 250 mM KCl 溶液。

    在 90 ml 的去离子水中溶解 1.86 g KCl 后, 定容至 100 ml。

  2. 配制 2 M MgCl₂ 溶液。

    在 90 ml 去离子水中溶解 19 g MgCl₂ 后, 定容至 100 ml, 高温高压灭菌。

  3. 称取下列试剂, 置于 1 L 烧杯中。
    • Tryptone 20 g
    • Yeast Extract 5 g
    • NaCl 0.5 g
  4. 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解。
  5. 量取 10 ml 250 mM KCl 溶液, 加入到烧杯中。
  6. 滴加 5 N NaOH 溶液 (约 0.2 ml), 调节 pH 值至 7.0。
  7. 加入去离子水将培养基定容至 1 L。
  8. 高温高压灭菌后, 4℃保存。
  9. 使用前加入 5 ml 灭菌的 2 M MgCl₂ 溶液。

SOC 培养基

组份浓度:

  • 2% (W/V) Tryptone
  • 0.5% (W/V) Yeast Extract
  • 0.05% (W/V) NaCl
  • 2.5 mM KCl
  • 10 mM MgCl₂
  • 20 mM 葡萄糖

配制量: 100 ml

配制方法:

  1. 配制 1 M 葡萄糖溶液。

    将 18 g 葡萄糖溶于 90 ml 去离子水中, 充分溶解后定容至 100 ml, 用 0.22 µm 滤器过滤除菌。

  2. 向 100 ml SOB 培养基中加入除菌的 1 M 葡萄糖溶液 2 ml, 均匀混合。
  3. 4℃保存。

2×YT 培养基

组份浓度:

  • 1.6% (W/V) Tryptone
  • 1% (W/V) Yeast Extract
  • 0.5% (W/V) NaCl

配制量: 1 L

配制方法:

  1. 称取下列试剂, 置于 1 L 烧杯中。
    • Tryptone 16 g
    • Yeast Extract 10 g
    • NaCl 5 g
  2. 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解。
  3. 滴加 5 N NaOH, 调节 pH 值至 7.0。
  4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。
  5. 高温高压灭菌后, 4℃保存。

Φb × broth

组份浓度:

  • 2% (W/V) Tryptone
  • 0.5% (W/V) Yeast Extract
  • 0.5% (W/V) MgSO₄·7H₂O

配制量: 1 L

配制方法:

  1. 称取下列试剂, 置于 1 L 烧杯中。
    • Tryptone 20 g
    • Yeast Extract 5 g
    • MgSO₄·7H₂O 5 g
  2. 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解。
  3. 滴加 1 N KOH, 调节 pH 值至 7.5。
  4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。
  5. 高温高压灭菌后, 4℃保存。

NZCYM 培养基

组份浓度:

  • 0.5% (W/V) Yeast Extract
  • 0.1% (W/V) Casamino Acid
  • 1% (W/V) NZ 胺
  • 0.5% (W/V) NaCl
  • 0.2% (W/V) MgSO₄·7H₂O

配制量: 1 L

配制方法:

  1. 称取下列试剂, 置于 1 L 烧杯中。
    • Yeast Extract 5 g
    • Casamino Acid 1 g
    • NZ 胺 10 g
    • NaCl 5 g
    • MgSO₄·7H₂O 2 g
  2. 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解。
  3. 滴加 5 N NaOH (约 0.2 ml), 调节 pH 值至 7.0。
  4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。
  5. 高温高压灭菌后, 4℃保存。

NZYM 培养基

组份浓度:

  • 0.5% (W/V) Yeast Extract
  • 1% (W/V) NZ 胺
  • 0.5% (W/V) NaCl
  • 0.2% (W/V) MgSO₄·7H₂O

配制量: 1 L

配制方法:

NZYM 培养基除不含 Casamino Acid (酪蛋白氨基酸) 外, 其他成份与 NZCYM 培养基相同。

NZM 培养基

组份浓度:

  • 1% (W/V) NZ 胺
  • 0.5% (W/V) NaCl
  • 0.2% (W/V) MgSO₄·7H₂O

配制量: 1 L

配制方法:

NZM 培养基除不含 Yeast Extract (酵母提取物) 外, 其他成份与 NZYM 培养基相同。

一般固体培养基的配制

配制方法:

  1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基, 在高温高压灭菌前, 加入下列试剂中的一种。
    • Agar (琼脂: 铺制平板用) 15 g/L
    • Agar (琼脂: 配制顶层琼脂用) 7 g/L
    • Agarose (琼脂糖: 铺制平板用) 15 g/L
    • Agarose (琼脂糖: 配制顶层琼脂用) 7 g/L
  2. 高温高压灭菌后, 戴上手套取出培养基, 摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀 (此时培养基温度很高, 小心烫伤)。
  3. 待培养基冷却至 50~60℃时, 加入热不稳定物质 (如抗生素等), 摇动容器充分混匀。
  4. 铺制平板 (30~35 ml 培养基/90 mm 培养皿)。

LB/Amp/X-Gal/IPTG 平板培养基

组份浓度:

  • 1% (W/V) Tryptone
  • 0.5% (W/V) Yeast Extract
  • 1% (W/V) NaCl
  • 0.1 mg/ml Ampicillin
  • 0.024 mg/ml IPTG
  • 0.04 mg/ml X-Gal
  • 1.5% (W/V) Agar

配制量: 1 L

配制方法:

  1. 称取下列试剂, 置于 1 L 烧杯中。
    • Tryptone 10 g
    • Yeast Extract 5 g
    • NaCl 10 g
  2. 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解。
  3. 滴加 5 N NaOH (约 0.2 ml), 调节 pH 值至 7.0。
  4. 加去离子水将培养基定容至 1 L 后, 加入 15 g Agar。
  5. 高温高压灭菌后, 冷却至 60℃保存。
  6. 加入 1 ml Ampicillin (100 mg/ml)、1 ml IPTG (24 mg/ml)、2 ml X-Gal (20 mg/ml) 后均匀混合。
  7. 铺制平板 (30~35 ml 培养基/90 mm 培养皿)。
  8. 4℃避光保存。

TB/Amp/X-Gal/IPTG 平板培养基

组份浓度:

  • 1.2% (W/V) Tryptone
  • 2.4% (W/V) Yeast Extract
  • 0.4% (V/V) Glycerol
  • 17 mM KH₂PO₄
  • 72 mM K₂HPO₄
  • 0.1 mg/ml Ampicillin
  • 0.024 mg/ml IPTG
  • 0.04 mg/ml X-Gal
  • 1.5% (W/V) Agar

配制量: 1 L

配制方法:

  1. 配制磷酸盐缓冲液 (0.17 M KH₂PO₄, 0.72 M K₂HPO₄) 100 ml。

    溶解 2.31 g KH₂PO₄ 和 12.54 g K₂HPO₄ 于 90 ml 的去离子水中, 搅拌溶解后, 加去离子水定容至 100 ml, 高温高压灭菌。

  2. 称取下列试剂, 置于 1 L 烧杯中。
    • Tryptone 12 g
    • Yeast Extract 24 g
    • Glycerol 4 ml
  3. 加入约 800 ml 的去离子水, 充分搅拌溶解。
  4. 加去离子水将培养基定容至 1 L 后, 加入 15 g Agar。
  5. 高温高压灭菌后, 冷却至 60℃保存。
  6. 加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1 ml Ampicillin (100 mg/ml)、1 ml IPTG (24 mg/ml)、2 ml X-Gal (20 mg/ml) 后均匀混合。
  7. 铺制平板 (30~35 ml 培养基/90 mm 培养皿)。
  8. 4℃避光保存。